细胞增殖检测方法大全   

细胞增殖检测的应用相当广泛，不论是测试药物试剂还是生长因子的效果，不论是评估细胞毒性还是分析细胞活性状态，在科研实验中都可能会用到它。那么，我们来了解一下，什么是细胞增殖检测？细胞增殖检测一般是检测分裂中的细胞数量或者细胞群体发生的变化。细胞增殖检测主要分为四类：DNA合成检测、代谢活性检测、细胞增殖相关抗原检测和ATP浓度检测。在这些方法中作何选择，主要取决于小伙伴所研究的细胞类型和研究方案。

   

接下来，

我们来了解一下细胞增殖检测的几种方法吧

DNA合成检测

 

DNA合成检测是目前实验室中检测细胞增殖最准确可靠的方式。

传统方法是，将放射性标记的³H-胸腺嘧啶与细胞一同孵育几小时或者孵育过夜。这样新增殖细胞的DNA中就会掺入放射性标记，经洗脱后可用闪烁计数器SC检测。

优点：³H-TdR准确可靠，敏感性高，重复性好。缺点：闪烁计数器价格不菲，时间耗时长而且还有个明显的弊端，那就是使用和处理放射性物质既麻烦又不安全。

代谢活性检测

 

检测细胞群体的代谢活性也可以反映细胞增殖的情况。在细胞增殖过程中乳酸脱氢酶的活性会增加，因此四唑盐或者Alamar Blue在代谢活跃的细胞环境中会逐渐减少，形成能够改变培养基颜色的甲臜染料。你可以通过低配置或高配置的分光光度计和酶标仪来读取含染料培养基的吸光度，从而衡量细胞的代谢活性，检测细胞增殖的情况。

 

四种最常见的四唑盐是：MTT、XTT、MTS和WST1。MTT在标准的细胞培养基中是不溶的，而且其生成的甲臜晶体需要溶解在DMSO或者异丙醇中。因此，MTT主要作为终点检测方法。其他三种盐与Alamar Blue一样，都是可溶且无毒的。它们可以作为连续监控手段来跟踪细胞增殖的动态改变。其中XTT的效率较低，需要添加额外的因子。而WST1更灵敏有效，与其他盐相比能够更快显色。Alamar Blue的灵敏度也很高，只要微孔板的孔中有100个细胞它就能够检测到。四唑盐和Alamar Blue氧化还原染料能够用于多种仪器和高通量研究，非常方便。

增殖标志检测

 

有些抗原只存在于增殖细胞中，而非增殖细胞缺乏这些抗原，你也可以通过特异性的单抗来对细胞增殖进行检测。例如，在人体细胞中，Ki-67抗体识别同名蛋白，在细胞周期S期、G2期和M期表达，而在G0期和G1 期(非增殖期)不表达。用针对Ki-67蛋白的抗体就可以检测细胞的增值情况。由于需要组织切片，这种方法无法进行高通量分析。不过这一方法颇受癌症研究者们的青睐，因为它能够用来检测体内肿瘤细胞的增殖。其他普遍使用的细胞增殖或细胞周期调控标志还包括，增殖细胞核抗原PCNA、拓扑异构酶IIB和磷酸化组蛋白H3。

ATP检测

 

细胞内的ATP含量受到了严格调控，检测ATP也可以得到细胞增殖的信息。死亡细胞或即将死亡的细胞几乎不含ATP，在细胞溶解物或提取物中测得的ATP浓度与细胞数之间存在严格的线性关系。利用荧光素酶luciferase及其底物荧光素luciferin的ATP检测以生物发光为基础，能够为你提供非常灵敏的结果。如果有ATP存在荧光素酶就会发光，而且其发光强度与ATP浓度成正比，用能读取发光信号的光度计和酶标仪都可以方便的进行检测。这种方法非常适用于高通量细胞增殖检测和筛选。

 

无论哪种检测方法，适合才是最好的！

怎样选择最适合自己的检测方法，这取决于细胞类型和研究方案，当然还取决于细胞增殖中期望得到的信息。举例来讲，假如您已经有了待测细胞(不论是在培养板还是在溶液中)，希望了解细胞增殖中的代谢活性变化，那您可以使用四唑盐和比色法检测。相应的，如果你对DNA合成的改变更感兴趣，可以选择用BrdU标记，再通过比色法、化学发光或荧光检测进行分析。若你研究的是单个细胞，也可以用BrdU标记来检测DNA合成，将其与荧光标记的相应抗体结合，你就可以通过流式细胞仪来进行流式分选。

 

标记肿瘤细胞核，揭示细胞增殖特性的研究指标包括氚胸腺嘧啶核苷(³H- TdR) 掺入、BrdU 掺入、增殖细胞核抗原(PCNA) 表达、ki67 抗原表达、核仁组成区观察及细胞核有丝分裂计数等。非放射性标记物溴脱氧尿嘧啶核苷(Bromodeoxyuridine ,BrdU) 掺入S 期细胞的机制同³H- TdR ,能与内源性胸腺嘧啶竞争掺入新合成的DNA。80 年代以来,国外对BrdU标记方法进行了大量研究, 已证明与³H-TdR 标记的结果有良好相关性。用BrdU替代³H- TdR 可避免放射性污染问题,且检测方便迅速。

因为BrdU也同样可以掺入到新合成的DNA中并且BrdU为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗BrdU单克隆抗体，ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。因组织细胞内无内源性BrdU存在，所以BrdU应用较广。该方法的好处就是让你不需要再和放射性物质打交道。BrdU标记很适合免疫组化IHC、免疫细胞化学ICC、细胞内ELISA、流式细胞分析和高通量筛选。

 

这么常用的抗体，当然ABclonal必会倾力推荐给大家。

BrdU Monoclonal Antibody

Catalog:A1482

Immunohistochemistry of paraffin-embedded mouse jejunum, without (left) and with (right) BrdU incorporation, using BrdU antibody at dilution of 1:300 (40x lens).